霍山石斛種苗繁育技術(shù)規(guī)程(正文)

1  范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了霍山石斛（Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng）種苗繁育的種源,、蒴果選擇與處理,、種苗培育,、種苗質(zhì)量,、存放及假植,、文件記錄和檔案管理,。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于利用霍山石斛種子,，采用無菌播種技術(shù)繁育霍山石斛種苗,。

2  規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的,。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件,。凡是不注日期的引用文件,，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T 3543.2  農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程  扦樣

GB/T 5749  生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

3  術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

原球莖  protocorm

種子經(jīng)過胚的膨大,，種皮破裂后形成肉眼可見淺黃色呈球狀或圓錐狀的原胚,。

3.2

叢生芽  multiple shoot

原球莖經(jīng)誘導(dǎo)產(chǎn)生數(shù)量眾多、簇生的芽,。

4  種源

4.1  原植物

原植物應(yīng)符合《中國植物志》收載的蘭科植物霍山石斛（Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng）的植物特征,，經(jīng)過鑒定確認(rèn)。

4.2  留種要求

留種植株應(yīng)選擇生長健壯的植株,，且在直徑1Km內(nèi)無其它種類石斛,。在花期，進行異花授粉,，母本在授粉后立即摘除唇瓣,，及時掛牌標(biāo)示。授粉當(dāng)年10月份以后,，蒴果開始轉(zhuǎn)黃時,，選擇成熟飽滿的蒴果采收。

5  蒴果選擇及處理

5.1  蒴果選擇

選擇成熟飽滿,、無病蟲害、無機械損傷,、無自然開裂的蒴果,。

5.2  蒴果處理

用水充分清洗蒴果表面的灰塵，所用水質(zhì)執(zhí)行GB/T 5749,。晾干表面的水份,，用潔凈紙進行包裹，在4℃冰箱中保存一周,。處理后的蒴果用75%酒精浸泡15min～20min后在酒精燈火焰上灼燒1S～2S,，備用。

6  種苗培育

6.1  無菌播種

在無菌條件下,，用鑷子夾住消毒處理過的蒴果果柄,，用解剖刀切開蒴果頂端，將蒴果置于培養(yǎng)瓶內(nèi)輕輕的抖動,，均勻撒播一層種子于MS培養(yǎng)基表面,，立即封住瓶口。

6.2　種子萌發(fā)

播種的培養(yǎng)瓶置于溫度為（25士2）℃的潔凈環(huán)境中暗培養(yǎng)1周后,，在光照強度為1500μmol·m^－2·s^－1～2000μmol·m^－2·s^－1,，光照時長為10h/d～12h/d的條件下，繼續(xù)培養(yǎng)30d～45d形成原球莖,。

6.3  原球莖增殖

選取健康飽滿,、無污染的原球莖在改良MS培養(yǎng)基上,進行原球莖增殖。光照強度為1500μmol·m^－2·s^－1～2000μmol·m^－2·s^－1，光照時長為10h/d～12h/d,，繼代培養(yǎng)55d～65d,。

6.4  叢生芽誘導(dǎo)

選擇健康，無污染的原球莖在改良MS培養(yǎng)基上,誘導(dǎo)叢生芽,。光照強度為1500μmol·

m^－2·s^－1～2000μmol·m^－2·s^－1,，光照時長為10h/d～12h/d，培養(yǎng)40d～55d,。

6.5  叢生芽增殖

選擇健康,，無污染的叢生芽在改良MS養(yǎng)基上,進行叢生芽增殖。光照強度為1500μmol·

m^－2·s^－1～2000μmol·m^－2·s^－1,，光照時長為10h/d～12h/d,，培養(yǎng)50d～70d。

6.6  生根壯苗

選擇芽體健康,，無污染,，芽高1.5cm～2.5cm的叢生芽在1/2MS培養(yǎng)基上,生根壯苗。光照強度為1500μmol·m^－2·s^－1～3000μmol·m^－2·s^－1,，光照時長為10h/d～12h/d,，培養(yǎng)65d～75d。

6.7  繼代次數(shù)

原球莖和叢生芽繼代次數(shù)控制在4代以內(nèi),。

7  種苗質(zhì)量

7.1  煉苗

種苗在溫度15℃～35℃,、光照2000μmol·m^－2·s^－1～20000μmol·m^－2·s^－1范圍條件下鍛煉15d～20d后，種苗葉片變深綠即可出瓶,。

7.2  出瓶洗苗

打開瓶口,，用鑷子將經(jīng)過煉苗后的種苗輕輕夾出，在流動的水下進行清洗,，洗凈根部附著的培養(yǎng)基,。

7.3  消毒

將清洗好的種苗用廣譜性殺菌劑稀釋噴霧或浸泡 5s～10s。處理后置于陰涼地方平攤存放,，切忌堆放過厚,。

7.4  種苗要求

用于栽培的種苗應(yīng)無污染、無爛莖,、無爛根,、無黃葉、葉色深綠且正常展開,。

7.5  種苗分級

種苗分級見表1,。

表1  霍山石斛種苗分級

7.6  判定規(guī)則

7.6.1  抽樣

按GB/T 3543.2執(zhí)行。

7.6.2  根數(shù)

目測根數(shù),。

7.6.3  葉片數(shù)

目測葉片數(shù),。

7.6.4  株高

用分度值1mm直尺測量莖基部至最高葉片尖端的距離,。

7.6.5  莖粗

用游標(biāo)卡尺測量莖的最粗部位值。

7.6.6  等級判定

根數(shù),、葉片數(shù),、株高、莖粗四項指標(biāo)必須同時達到本標(biāo)準(zhǔn)7.5指標(biāo)要求的方可判定為一級苗或二級苗,。四項指標(biāo)中即使有三項指標(biāo)達到一級苗標(biāo)準(zhǔn),，而另一項只達到二級苗標(biāo)準(zhǔn)，則為二級苗,；四項指標(biāo)中即使有三項指標(biāo)達到二級苗標(biāo)準(zhǔn),，而另一項未達到二級苗標(biāo)準(zhǔn)，判定為不合格苗,。

8  存放

消毒后的種苗存放時應(yīng)注意通風(fēng),、透氣，并附上標(biāo)簽,。存放期間應(yīng)保持葉片不萎蔫,，不脫水，可噴水增加葉片濕度,，所用水質(zhì)執(zhí)行GB/T 5749,。消毒后的種苗在根部晾干發(fā)白后72ｈ內(nèi)栽種完畢。

9  假植

出苗后3d內(nèi)不能立即外運或栽植的,，要進行假植,。假植設(shè)施和條件要滿足石斛生長的要求，冬季配備必要的防凍保溫設(shè)備,。

10 文件記錄和檔案管理

10.1  基礎(chǔ)資料

蒴果的來源,留種植株的栽培基質(zhì)、施肥種類,、施用量,、次數(shù),留種植株病蟲防治的用藥種類、施藥方法,、時間,、次數(shù),以及留種植株其它各種農(nóng)事管理措施均應(yīng)作詳細(xì)的生產(chǎn)記錄。蒴果采收批次,、時間,、處理方法、條件和時間等也應(yīng)做詳細(xì)記錄,。

10.2  生產(chǎn)管理記錄

包括蒴果用量,、育苗條件、培養(yǎng)時間,、培養(yǎng)管理,、煉苗情況,、栽植時間、栽植后成活率等記錄,。

10.3  檔案管理

所有基礎(chǔ)資料及生產(chǎn)管理資料均應(yīng)建立檔案并由專人保管,，長期保存，具備條件的應(yīng)建立計算機檔案管理系統(tǒng),。

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